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免疫組化染色結(jié)果分析

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免疫組化染色結(jié)果分析需結(jié)合組織特異性標(biāo)記物表達(dá)模式、染色強(qiáng)度及定位進(jìn)行綜合判斷，主要影響因素有抗體特異性、組織固定質(zhì)量、抗原修復(fù)方法、內(nèi)源性干擾物質(zhì)及實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范性。

1、抗體選擇

抗體特異性直接影響結(jié)果可靠性。需驗(yàn)證抗體與目標(biāo)抗原的結(jié)合能力，排除交叉反應(yīng)。常用驗(yàn)證方法包括Western blot、基因敲除對(duì)照。例如檢測(cè)ER蛋白應(yīng)選用經(jīng)FDA批準(zhǔn)的克隆號(hào)SP1抗體，避免使用多克隆抗體導(dǎo)致假陽(yáng)性。

2、樣本處理

組織離體后應(yīng)在30分鐘內(nèi)完成固定，使用10%中性緩沖福爾馬林固定6-48小時(shí)。過(guò)度固定會(huì)導(dǎo)致抗原表位掩蔽，固定不足易出現(xiàn)組織自溶。骨髓等特殊標(biāo)本需采用B5固定液，脂肪組織建議延長(zhǎng)固定至24小時(shí)。

3、抗原修復(fù)

高溫高壓修復(fù)法適用于多數(shù)核抗原，pH6.0檸檬酸緩沖液可有效暴露Ki-67等增殖標(biāo)志物。膜蛋白CD20建議采用EDTA修復(fù)液。酶消化法對(duì)部分胞質(zhì)抗原如CD3效果顯著，但需控制胰酶濃度在0.05%-0.1%。

4、染色評(píng)估

陽(yáng)性信號(hào)應(yīng)呈現(xiàn)特定亞細(xì)胞定位，核蛋白如p53需觀察細(xì)胞核著色，HER2檢測(cè)要求膜染色完整度超過(guò)10%。采用半定量評(píng)分系統(tǒng)：0分無(wú)著色，1+弱陽(yáng)性，2+中等強(qiáng)度，3+強(qiáng)陽(yáng)性。對(duì)照組織必須同步顯示預(yù)期染色模式。

5、結(jié)果解讀

結(jié)合形態(tài)學(xué)特征排除假陽(yáng)性，如巨噬細(xì)胞CD68非特異性吞噬、邊緣效應(yīng)導(dǎo)致的邊緣強(qiáng)染色。雙重染色技術(shù)可驗(yàn)證共表達(dá)情況，必要時(shí)進(jìn)行基因檢測(cè)補(bǔ)充。乳腺癌HER2檢測(cè)需遵循ASCO/CAP指南，2+結(jié)果必須進(jìn)行FISH驗(yàn)證。

建議由兩名以上病理醫(yī)師獨(dú)立判讀，建立實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，定期參加CAP能力驗(yàn)證。對(duì)于臨界值結(jié)果應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，臨床治療相關(guān)標(biāo)志物需在報(bào)告中注明檢測(cè)方法及判讀標(biāo)準(zhǔn)。日常維護(hù)需定期校準(zhǔn)自動(dòng)染色儀，每批次實(shí)驗(yàn)設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照，未達(dá)預(yù)期染色效果時(shí)應(yīng)追溯實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)。

溫馨提示：醫(yī)療科普知識(shí)僅供參考，不作診斷依據(jù)；無(wú)行醫(yī)資格切勿自行操作，若有不適請(qǐng)到醫(yī)院就診
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